Probablement fils d'Aménophis III et frère ou demi-frère d'Akhenaton, celui qui se nomme encore Toutankhaton (image vivante d'Aton) épouse Ankhsenpaaton (future Ankhsenamon), la troisième fille d'Akhenaton et de Néfertiti. Vers l'âge de neuf ans, il succède à son beau-père sur le trône d'égypte. Sous l'influence de son tuteur Aÿ et du général des armées Horemheb, tous deux adorateurs du dieu Amon-Rê, il change son nom pour Toutankhamon (image vivante d'Amon) et restaure les traditions religieuses polythéistes délaissées par son prédécesseur, Akhénaton, en particulier le culte d'Amon.
Sous son règne, la paix s'installe en égypte tandis que le souverain déplace sa résidence à Thèbes, aux dépens de la capitale d'Akhenaton, Akhetaton. Vers 1343 avant JC, après neuf ans de règne, Toutankhamon meurt, peut-être assassiné. Il n'avait pas vingt ans. Bien que pharaon de second plan, il est inhumé selon le somptuaire des rites funéraires royaux. En l'absence d'héritier, Aÿ épouse la veuve de Toutankhamon et monte sur le trône d'égypte pour quatre ans, avant qu'Horemheb lui succède, mettant ainsi fin à la XVIIIème dynastie.
La découverte de la tombe de Toutankhamon : Roi méconnu, Toutankhamon est devenu célèbre lorsque deux égyptologues découvrent, dans la vallée des Rois, une tombe ayant échappé au pillage. Le 4 novembre 1922, Howard Carter et lord Carnarvon trouvent l'entrée de l'hypogée et entrent bientôt dans la chambre funéraire du roi. Plus de six ans sont nécessaires pour vider la tombe de ses quelque 3 000 trésors. Fouille archéologique la plus spectaculaire jamais effectuée en égypte, la tombe de Toutankhamon est la seule intacte du Nouvel Empire mise au jour. La mort de lord Carnarvon, en avril 1923, a donné naissance au mythe de la malédiction de Toutankhamon.